Morfologia e Fisiologia de protozoários de vida livre. Tipo escolhido: Paramecium.

INTRODUÇÃO

No estudo prático anterior você pôde observar a diversidade de formas e estruturas do grupo não natural de Protoctista denominado protozoário, notadamente de sarcomastigóforos e ciliados. O primeiro reúne táxons diversos como rizópodos, coanoflagelados e Trypanosoma, sendo uma das razões para a suposição atual de ser um grupo polifilético; o segundo forma um grupo relativamente homogêneo, considerado monofilético por certos autores contemporâneos.

O estudo de hoje, com base em um representante dos ciliados, é fundamental para a compreensão de como protozoários unicelulares suprem as mesmas necessidades vitais básicas dos animais, isto é, metazoários.

OBJETIVOS

• Reconhecer as organelas de Paramecium.
• Associar organelas com funções.
• Praticar o uso de técnicas de coloração e afins.

MATERIAL DE ESTUDO

• Culturas mistas ou puras e lâminas permanentes.

MATERIAL DE APOIO

* Mistura preparada no momento de uso, na proporção 1:1.

PROCEDIMENTO

1. Observação de paramécios vivos, imobilizados ou com movimentos reduzidos.

Ao microscópio estes organismos parecem locomover-se rapidamente, pois sua velocidade é multiplicada pelo aumento empregado. Portanto é necessário limitar os deslocamentos, reduzir os movimentos ou anestesiar os paramécios. Você vai imobilizar ou ainda melhor, reduzir os movimentos desses ciliados.

Para imobilizá-los, colocar algumas poucas fibras de algodão sobre lâmina, depositar uma gota do líquido de cultura e cobrir com lamínula; para reduzir os movimentos, aumentar a viscosidade do meio adicionando uma gota de clara de ovo ( pode ser saliva ou uma solução a 0,5% de goma arábica); para anestesiar podem ser usados: sulfato de níquel a 0,1% ( duas gotas para 20 gotas do meio de cultura por 1 a 2 minutos), fosfato monopotássico a 1,4%, álcool metílico a 10%.

1.1. Observação sem coloração

Observar e/ou desenhar: (a) a forma geral; (b) posição/ atividade dos vacúolos contráteis e seus canais; (c) as organelas de nutrição: vestíbulo ciliado na face oral; perístoma, cavidade arqueada que se liga com um citóstoma (este último abre-se diretamente em um vacúolo digestivo, também chamado gastríolo); (d) posição do aparelho nuclear ; (e) locomoção: prepare uma lâmina sem clara de ovo e observe a direção que os batimentos ciliares projetam o paramécio; a seguir imobilize-os, adicione uma gotícula de tinta nanquim e observe a direção que a água é impulsionada; observe também a orientação do movimento de rotação e a propagação das ondas de contração ciliar.

Exercício: explique a direção da locomoção, os movimentos de rotação e propagação das ondas com base na disposição e mecanismos de funcionamento dos cílios.

(f) Reação a estímulos: quando um paramécio toca em um obstáculo, faz um movimento de marcha à ré, gira em ângulo de aproximadamente 30° e prossegue para a frente, tal comportamento é chamado Lei de tentativa e erro. Mas quando dois indivíduos estão se dirigindo um para o outro e a reação é mudar de direção, Tactismo de contato é a denominação.

Responda: que organelas sensoriais seriam responsáveis por essas respostas?

(g) Respiração: observe como os paramécios se reúnem em torno de bolhas de ar ou se regrupam nos bordos das lamínulas - é um quimiotropismo positivo; (h) osmorregulação : a água dita "doce" é hipotônica em relação ao meio interno dos protozoários que aí vivem, por isto a entrada constante da mesma tende a diluí-lo; assim a expulsão do excesso de água, assim como de excretas, faz-se por meio de organelas especializadas, os vacúolos contráteis.

Responda: por que os vacúolos têm posição fixa nos paramécios e outros ciliados? Há quantas pulsações por minuto? (Faça a contagem com um colega).

Exercício: represente graficamente a câmara central e canais periféricos quando em sístole e quando em diástole.

( i) Reprodução: na eventual ocorrência de divisão binária, observe o sentido do plano de divisão e faça um esquema.

1.2. Observação com carmim em pó : adicionar uma quantidade infinitesimal de carmim e observar o redemoinho produzido pela atividade ciliar do vestíbulo, a formação de vacúolos digestivos e seu movimento conhecido como ciclose (distribuição de alimento).

1.3. Observação após coloração vital : adicionar azul de metileno e examinar vacúolos contráteis e macronúcleo.

Exercício: com base em livros, faça um esquema da estrutura fina do ectoplasma de Paramecium.

1.4. Após fixação ou coloração supra-vital: o verde de metila acidificado evidencia o aparelho nuclear, mas o micronúcleo é difícil de visualizar, pois freqüentemente está em uma depressão do macronúcleo; certas impurezas (violeta de metila) deste corante coram vacúolos digestivos; o lugol , que não é corante, é empregado para evidenciar as seguintes estruturas: inclusões citoplasmáticas , distribuição dos cinetossomos, núcleo , hialoplasma; com a mistura cianopícrica você pode observar os tricocistos expulsos pelo Paramecium.

Exercício: faça um desenho esquemático de Paramecium com tricocistos descarregados.

1.5. Observação de preparações permanentes : observe divisão binária e conjugação.

QUESTÕES ADICIONAIS PARA DISCUSSÃO

Justifique a seguinte afirmativa: o paramécio tem a mesma complexidade de um metazoário.

Que fatos essenciais da sexualidade podem ser reconhecidos na conjugação?

BIBLIOGRAFIA INDICADA

Um ou mais livros contidos na Bibliografia da disciplina (anexo ao plano de curso)

Solange Peixinho

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